Development of An Antiviral Blocking Therapeutic Agent Against SARS-Cov-2

إن جائحة كورونا المستجد سببها فيروس سارس-كوفي 2-، و الي يهاجم الجهاز التنفسي و الذي أصاب أكثر من مليوني شخص عى مستوى العالم، مؤخراً تم تحديد كيفية دخول الفيروس لخلايا الجهاز التنفسي، حيث يرتبط جزء من اس بروتبن )الجزء القابض للمستقبل الخلوي( مع المستقبل الخلوي )انزيم محول للأنجيوتنسين 2(، و قد لوحظ في تشخيص الأعراض أنها قد تصل إلى متلازمة الضائقة التنفسية الحادة، فلذلك يعد تطوير أدوية مضادة للفيروس أمراً مهماً للغاية، إحدى طرق المعالجة تكون من خ ال منع الإرتباط الجزء القابض للمستقبل الخلوي مع المستقبل الخلوي من خ ال ضخ انزيم محول للأنجيوتنسين 2 الذي يعتبر كشرك للفيروس، و هذه الطريقة لا تتأثر بأي تغييرات جينية في الفيروس عى خ اف المعالجة بالأجسام المضادة، و لتحسين أداء المستقبل الخلوي كشرك للفيروس سنقوم بربطه بالاف سي من الأجسام المضادة لإعطاء البروتين الهجين خصائص متميزة من مثل البلعمة الخلوية المعتمدة عى الأجسام المضادة، ولزيادة قوة تأثير هذه الخاصية، سنقوم بعمل بعض التغييرات في السكريات المرتبطة في جزء الأف سي، سنقوم بإتاج البروتين المؤتلف من خ ال خلايا حيوانية عن طريق التعبير العابر، وسيتم تنقيتهم عن طريق الكراماتوقرافي، وسيتم التدقيق في البنية الثانوية للبروتيانت المصنعة، كما سيتم التحقق من قوة الربط الجزيئي بين البروتبن المصنع و الجزء القابض للمستقبل الخلوي من خ ال تقنية التداخل ثنائي الطبقات، كما سيتم صناعة و تخليق فيروس زائف و التحقق من منع دخوله لخلايا تحتوي انزيم محول للأنجيوتنسين 2 من خ ال البروتين المصنع الذي سيعمل كشك للفيروس المزيف مانعاً له من غزوه للخلية، و في النهاية سيتم التحقق من أن التغييرات في السكريات المرتبطة عى جزء الأف سي من البروتين المصنع سيكون لها تأثير ذلك عى البلعمة الخلوية المعتمدة عى الأجسام المضادة و أثر هذا عى التخلص من الخلايا التي تحتوي عى اس بروتين الفيروسي.

The COVID-19 disease is a continuing pandemic caused by SARS-CoV-2. SARS-CoV-2 attacks the respiratory system causing viral pneumonia. Globally, more than two million people are infected with SARS CoV-2. The proposed pathogenesis of SARSCoV- 2 infection starts by binding between the receptor-binding domain (RBD) of SARS-CoV-1 spike protein and its host cell receptor “angiotensin-converting enzyme 2 (ACE2)”. The symptoms of the viral infection can go up to acute respiratory distress syndrome. Thus, development of therapeutic antiviral treatments is vital. One approach to prevent binding of SARSCoV- 2 to ACE2 is to deliver ACE2 as a decoy. Using decoy protein as an antiviral countermeasure is unaffected by mutations that occur in RBD. In order to boost the antiviral capabilities of ACE2, we will fuse it to immunoglobin’s Fc mediating immunological effector functions such as antibody dependent cellular phagocytosis (ADCP). ADCP has been shown as the major immunological effector function helping in elimination of SARS-CoV-infected pulmonary cells in mouse models. In order to enhance the capabilities our novel molecule, N-glycan engineering techniques will be implemented to N-glcan site in the Fc domain to increase ADCP performance. The recombinant protein will be produced in HEK 293F via transient expression system. Two controls will be used in our study; soluble ACE2-His tagged, and ACE2 fused to wild type (WT) Fc (ACE2-Fc (WT)). The recombinant proteins will be purified by chromatography techniques. The fusion proteins will be assessed in terms of secondary structure. The binding kinetics of different proteins to SARS-CoV-2 RBD protein will be assessed using BLI. Pseudovirus will be produced and the ability to inhibit entry to HEK 293 T cells overexpressing ACE2 will be assessed. Finally, we are going to assess how the glycoengineered ACE2-Fc protein will have an enhanced phagocytosis of target cells expressing S spike viral protein.